色譜柱的特點(diǎn)和分類(lèi)
點(diǎn)擊次數(shù):4914 更新時(shí)間:2009-10-19
3-1 柱的結(jié)構(gòu)
1、堵棒(或?qū)Ч埽?、接頭 3、接頭 4、密封圈 5、螺帽 6、柱密封圈 7、柱管 8、柱填料 9 10、過(guò)濾片
3-2 柱的分類(lèi):
根據(jù)所有的擔(dān)體材料分為三種:
a.硅膠型:機(jī)械強(qiáng)度高,易制成小顆粒,理論塔板數(shù)高。
b.聚全物型:在廣泛的PH值范圍內(nèi)穩(wěn)定
c.羥基磷灰石型:對(duì)蛋白質(zhì)等生物高分子樣品有特殊的選擇性。
根據(jù)分離方式分類(lèi):
a.硅膠型
1) 正相:SIL--磷脂、NH--糖、維生素E,CN--甾類(lèi)激素。
2) 反相:ODS(C18)、(C8 CN TMS Pheny1)低分子量化全物。
3) 離子交換:
WAX(弱堿陰離子交換)--核苷酸、蛋白質(zhì)
WCX(弱酸陽(yáng)離子交換)--蛋白質(zhì)
SAX(強(qiáng)堿陰離子交換)--核苷酸
SCX(強(qiáng)酸陽(yáng)離子交換)--兒茶酚膠
4)凝膠過(guò)濾:
Diol--蛋白質(zhì) GF--蛋白質(zhì)
b.聚合物型:
1)反相:ODP--50--肽,蛋白質(zhì),低分化合物。
2)離子交換:ISC--氨基酸,胍類(lèi)化合物,ISA--糖,IC--無(wú)機(jī)離子,PA--蛋白質(zhì),ES--蛋白質(zhì)。
3)配位交換:SCR(磺化聚苯乙烯)--糖。
4)離子排阻:SCR-101H 102H--有機(jī)酸
5)凝膠過(guò)濾:ION--多糖 GS--水溶性分子
6)凝膠滲透色譜(GPC):GPD--合成分子、橡膠。
7)羥基磷灰石型:HPC--蛋白質(zhì)、核苷酸
按尺寸分類(lèi):
1.制備:30mm 50mm 內(nèi)徑,半制備:20mm內(nèi)徑。
2.分析:標(biāo)準(zhǔn)型柱:4_8mm內(nèi)徑。
快速色譜柱:3mm內(nèi)徑、5cm長(zhǎng)、4.6mm內(nèi)徑。
小孔徑柱:2.5mm內(nèi)徑,微孔徑柱1mm內(nèi)徑。
3-3柱的技術(shù)指標(biāo)
*耐壓:不小于40Mpa。
*滲透性:反相--流動(dòng)相甲醇1ml/min,壓力3Mpa。
正相--正乙烷1ml/min,壓力3Mpa.
*柱效:理論塔板極數(shù)>3x103。
*對(duì)稱(chēng)柱:葸峰不對(duì)稱(chēng)因子AS在0.8~2.0范圍內(nèi)。
*外觀:光潔、標(biāo)牌、尺寸、填充劑、流動(dòng)相方向、日期等。
ODS柱
ODS(C18)色譜柱是將十八烷基鍵合在擔(dān)體的表面,然后填充的柱,在HPLC中應(yīng)用廣。在HPLC中反相色譜的引用占70%,其中極大部分 使用的是ODS(C18)。本公司所附的柱也是ODS(C18)柱,內(nèi)徑4.6mm,長(zhǎng)度150mm。
一般反相色譜系統(tǒng),流動(dòng)相為極性溶劑,如水、甲醇、乙腈,非極性固定相,如十八烷基。反相系統(tǒng)簡(jiǎn)單,重復(fù)性好,柱子能長(zhǎng)期穩(wěn) 定工作,能完成分離、分析任務(wù)的60-80%,所以分析工作者使用得zui多的是反相柱。
柱的使用和維護(hù)
由于柱的質(zhì)量直接影響到樣品組分得分離情況,組分的定性,定量分析,所以在操作時(shí)必須十分注意。
通常柱子損壞表現(xiàn)為:柱壓升高,柱效下降,保留值改變,峰形崎變等。
以反相為列,它要求填料處于甲醇或乙腈中,不使柱子干枯,并注意下列事項(xiàng):
* 勿使柱子受較強(qiáng)振動(dòng)
* 較長(zhǎng)時(shí)間不用時(shí),應(yīng)在柱中充滿甲醇,并把兩頭封死,盡量不使干枯。
* 當(dāng)用水和甲醇(或乙腈)混合液體溶劑時(shí),工作結(jié)束后必須用純甲醇沖洗30分鐘至1個(gè)小時(shí),使柱子處于甲醇中,因水 易繁殖微生物, 使柱子堵塞,并降低柱效。
* 當(dāng)使用KH2PO4等緩沖液時(shí),鹽的濃度宜低,否則鹽容易析出,柱效降低,柱壓升高,使用后 必須用水沖洗( 絕不能用甲醇沖洗)使緩沖液全部溶于水排出,然后再用甲醇沖洗。
* 硅基固定相不宜在PH>8時(shí)使用,此時(shí)容易產(chǎn)生絮狀物析出,堵塞柱子。
* 當(dāng)流動(dòng)相呈酸性時(shí),使用后必須用水沖洗,因酸使柱效降低,后再用甲醇沖洗。
* 流動(dòng)相經(jīng)過(guò)過(guò)濾處理。
* 樣品也經(jīng)過(guò)過(guò)濾處理。
* 樣品有時(shí)能復(fù)蓋填料得活性點(diǎn),使柱壓升高,保留時(shí)間下降,防止方法是樣品經(jīng)過(guò)過(guò)濾。
* 樣品組分的不可逆吸附,使柱壓升高,柱效降低(通常易被吸附的有蛋白質(zhì)、糖)防止方法是加保護(hù)柱和溶劑反沖, zui常用的是四氫呋喃。
* 當(dāng)流動(dòng)相從A換到B時(shí),A、B不相溶,必須選擇一能同A、B互溶劑C,先換成C再把C換成B,zui常用的中間液是異丙醇。
* 由于長(zhǎng)期使用,在較大的壓力下,擔(dān)體破裂而流失在柱前端形成一段空隙,使柱效下降,峰形畸變。維護(hù)方法:卸下 接頭,用甲醇把填料調(diào)成糊狀,填入柱內(nèi),同時(shí)將過(guò)濾片用超聲波清洗機(jī)清洗一次。